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  3. 聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)的原理

    SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)是一種用于根據蛋白質混合物的大小分離其成分的分析方法。

    該技術基于這樣的原理,即帶電分子將在電場中朝具有相反符號的電極遷移。常規電泳技術不能用于確定生物分子的分子量,因為物質在凝膠中的遷移率取決于電荷和大小。

    為了克服這個問題,需要對生物樣品進行處理,以使其獲得均勻的電荷,然后電泳遷移率主要取決于尺寸。對于這種具有不同形狀和大小的蛋白質分子,需要進行變性(在SDS的幫助下完成),以使蛋白質失去二級,三級或四級結構。被SDS覆蓋的蛋白質帶負電,并在上樣時凝膠并置于電場中,它將朝著陽極(帶正電的電極)遷移,并通過基于分子篩分作用的大小分開。通過染色(蛋白質特異性)技術進行可視化后,可以通過將蛋白質的遷移距離與已知分子量階梯(標記)的遷移距離進行比較來計算蛋白質的大小。

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