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  3. 蛋白質印跡法的缺點

    蛋白質印跡是生化實驗室中**常見的程序之一?;旧?,它從大小上將蛋白質與樣品分開,然后使用抗體進行測試以確定是否存在給定的蛋白質。它不僅在研究中有用,而且在醫學或診斷實驗室中也有用。例如,針對HIV和萊姆病的檢測均包括酶聯**吸附測定(ELISA)檢測,如果ELISA檢測呈陽性,則進行蛋白質印跡分析。然而,盡管它很流行,但是蛋白質印跡具有一些缺點。

    非量化

    古典蛋白質印跡是非定量的。換句話說,盡管他們可以告訴研究人員是否存在某種特定的蛋白質,但他們無法量化存在多少蛋白質。一些生物技術公司現在出售試劑盒,使研究人員或實驗室技術人員能夠使用標準曲線定量蛋白質的含量-但這僅在有相同蛋白質的純樣品可用時才有效。此外,蛋白質的分子量只能通過蛋白質印跡法估算,而不能像質譜法那樣**確定。

    抗體

    僅當可獲得針對目的蛋白的一抗時,才能進行蛋白質印跡。生物技術公司可以提供許多不同蛋白質的抗體,但它們并不便宜;如果無法使用給定蛋白質的一抗,則無法進行蛋白質印跡以尋找特定蛋白質。此外,研究人員可能想確定某種蛋白質是否已被修飾(例如,是否已被磷酸化(例如,其上有一個磷酸基團連接)),并且通過蛋白質印跡技術,他們需要對該修飾蛋白具有特異性的抗體蛋白。

    訓練

    正確進行蛋白質印跡并獲得良好的結果可能具有挑戰性,因此**對員工進行良好的培訓。在這方面,經驗也許是**好的導師。即使對于有經驗的技術人員,蛋白質印跡也是費時的。例如,實驗的凝膠電泳儀部分通常需要一到兩個小時才能運行。當然,在凝膠運行時還可以執行其他任務,但是實驗仍然需要相當長的時間才能獲得結果。

    其他限制

    抗體有時可能會表現出脫靶結合,這可能導致較差的結果。此外,通過蛋白質印跡,您將使用針對特定蛋白質的抗體,因此您的結果只會告訴您該蛋白質是否存在。相比之下,高分辨率質譜分析揭示了樣品中存在的所有蛋白質,與經典的蛋白質印跡不同,它是定量的。當然,重要的是要記住,與蛋白質印跡法相比,質譜法昂貴得多,并且使用起來在技術上也更具挑戰性。


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