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  3. 如何計算DNA片段的長度



    在測量比細胞小得多的DNA片段的長度時,微生物學家需要技巧,而**方便的方法是凝膠電泳儀。此方法依賴于DNA片段帶電的事實,它是更昂貴的方法(例如X射線晶體學)的替代方法,該方法負責發現DNA的雙螺旋結構。

    凝膠電泳的工作原理

    由于DNA分子帶電,因此會受到電流的影響。當您將它們放在中性凝膠中并在凝膠上通電時,分子會向正極(陽極)遷移。因為不同大小的DNA分子帶有相同的電荷,所以較小的分子會更快地傳播,因此此過程將分子分成多個條帶,可以與已知大小的樣本進行比較。

    電泳基本程序

    該凝膠通常由瓊脂糖制成,瓊脂糖是一種多糖,在緩沖溶液中加熱后會形成半固體,微孔凝膠。在一端,凝膠形成微小的凹痕,稱為孔,研究人員將研究中的DNA樣品與已知長度的參考樣品(稱為DNA階梯)放置在一起。階梯片段的長度已經通過另一種方法例如X射線晶體學來預定。

    當凝膠浸入導電溶液中并施加電壓時,碎片開始遷移通過凝膠-先是較小的碎片,然后是較大的較慢的碎片。它們**終根據大小形成類似頻譜的波段。

    一旦發生這種情況,研究人員將關閉電源,用DVA結合染料注入凝膠,并在紫外線下檢查樣本。使用梯子作為參考,研究人員可以確定可見帶中每個片段的大小。只有條帶可見–單個DNA片段太小而看不見。

    確定未知片段的長度

    并非樣品中的每個譜帶都有可能與階梯上的譜帶配對,因此,為了確定這些未知片段的大小,科學家通常會繪制一個圖。x軸上的是梯子中每個頻段的行進距離(以毫米為單位),而y軸上的是每個頻段的大小。當這些點通過曲線連接時,在測量該帶行進的距離(以毫米為單位)后,可以從曲線中推斷出任何帶的大小。


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