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  3. 電泳中緩沖液的用途



    生物化學家和分子生物學家使用電泳儀來分離大分子,例如蛋白質和核酸。這使科學家能夠分離和分析復雜混合物中的單個蛋白質或核酸序列。實驗室中電泳的一個典型例子是微生物學家,使用聚合酶鏈反應(PCR)分離微生物群落中產生的DNA片段。無論目的如何,電泳儀始終需要使用緩沖液。

    TL; DR(太長;未讀)

    電泳通過大小,電荷和其他特性將大分子(如蛋白質和核酸)分開。對于通過電荷分離的電泳,科學家使用緩沖液將電荷傳輸通過凝膠。緩沖液還將凝膠保持在穩定的pH值,從而**大程度地減少了在不穩定的pH值下蛋白質或核酸發生的變化。

    電泳原理

    電泳根據分子的大小,電荷或其他特性沿梯度將其分離。該梯度可以是電場,或者在變性梯度凝膠電泳(DGGE)的情況下,可以是變性劑,例如尿素和甲酰胺的混合物。如果帶負電荷,蛋白質將向陽極遷移,如果帶正電荷,則蛋白質將向陰極遷移。由于大分子的遷移要比小分子慢,因此科學家可以測量行進的距離并使用對數確定碎片的大小。

    變性梯度凝膠電泳

    借助DGGE,DNA沿著變性能力增強的梯度移動,直到該能力足以使特定的DNA片段完全變性或展開。此時,遷移停止??茖W家可以使用這種方法根據片段對變性的敏感性來分離片段。

    緩沖區的作用

    在電泳基于電荷分離的情況下,緩沖液中的離子會傳輸分離所需的電荷。通過提供弱酸和弱堿的緩沖液,緩沖液還將pH值保持在狹窄的范圍內。這很重要,因為蛋白質或核酸的結構和電荷在pH發生明顯變化時會發生變化,從而阻止了正確的分離。

    典型緩沖器

    對于將電泳凝膠維持在不同的所需pH范圍,不同的緩沖液是理想的??茖W家為此目的使用的典型緩沖液包括乙酸,硼酸,磷酸和檸檬酸以及甘氨酸和?;撬?。通常,pKa值(酸解離常數)應接近所需的pH。對于我們而言,**好提供低電荷量的緩沖器,以免傳導過多電流。


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